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激酶試劑盒是通過以下兩種技術路徑實現檢測

更新時間:2025-08-27      瀏覽次數:98
  激酶試劑盒是一種基于激酶酶的特性設計的檢測試劑盒,用于測量激酶反應中所形成的特定產物(如ADP或磷酸化產物)的量,從而間接反映激酶的活性。激酶酶能夠將ATP(三磷酸腺苷)上的磷酸基團轉移到特定的底物上,生成相應的磷酸化產物,同時釋放出ADP(二磷酸腺苷)或AMP(一磷酸腺苷)。通過測定這些產物的生成量,可以評估激酶的活性。
  激酶試劑盒通過檢測激酶催化反應中ATP的消耗量或ADP的生成量,間接量化激酶活性。其原理基于激酶將ATP的磷酸基團轉移至底物(如蛋白質、多肽或小分子),導致ATP減少或ADP增加。試劑盒通過以下兩種技術路徑實現檢測:
  1、化學發光法
  原理:利用熒光素酶催化熒光素與ATP反應發光,發光強度與ATP濃度成正比。通過檢測反應后剩余ATP量,推算激酶活性。
  示例:Kinase-Lumi™試劑盒可檢測0-10μM ATP,適用于蛋白激酶(如STK3/MST2)及非蛋白激酶(如糖激酶)的活性分析。
  優勢:靈敏度高(可檢測低濃度ADP)、動態范圍寬(適用于低活性激酶如受體酪氨s激酶)、信號穩定(發光持續數小時)。
  2、比色法
  原理:通過檢測反應產物(如NADPH)的吸光度變化間接測定激酶活性。
  示例:NAD激酶(NADK)試劑盒利用NADK催化NAD+生成NADP+,后者被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH,在340nm處吸光度增加,吸光度變化率與NADK活性成正比。
  優勢:操作簡便、適用樣本廣泛(血清、血漿、組織、細胞等)、結果直觀。
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